кое-что о коже

Строение кожи

Марголина А.А. к.б.н., Эрнандес Е.И. к.б.н.

Строение эпидемиса

Эпидермис - это верхний, постоянно обновляющийся слой кожи. С дермой его связывает особая структура - базальная мембрана. Базальная мембрана - очень важное образование. Она служит фильтром, который не пропускает крупные заряженные молекулы, а также выполняет роль связующей среды между дермой и эпидермисом. Ученые считают, что через базальную мембрану эпидермис может влиять на клетки дермы, заставляя их усиливать или замедлять синтез различных веществ. Эта идея используется при разработке некоторых косметических средств, в которые вводятся особые молекулы - биорегуляторы, запускающие процесс дермо-эпидермального взаимодействия. На базальной мембране находится слой зародышевых клеток, которые непрестанно делятся, обеспечивая обновление кожи. Среди зародышевых клеток располагаются крупные отросчатые клетки - меланоциты и клетки Лангерганса. Меланоциты производят гранулы пигмента меланина, который придает коже определенный оттенок, от золотистого до темного или даже черного.

Клетки Лангерганса

Клетки Лангерганса происходят из семейства макрофагов. Подобно макрофагам дермы они исполняют роль стражей порядка, то есть защищают кожу от внешнего вторжения и управляют деятельностью других клеток с помощью регуляторных молекул. Отростки клеток Лангерганса пронизывают все слои эпидермиса, достигая уровня рогового слоя. Считается, что клетки Лангерганса могут уходить в дерму, проникать в лимфатические узлы и превращаться в макрофаги. Это привлекает к ним большое внимание ученых, как к связующему звену между всеми слоями кожи. Есть мнение, что клетки Лангерганса регулируют скорость размножения клеток базального слоя, поддерживая его на оптимально низком уровне. При стрессовых воздействиях, когда на поверхность кожи действуют химические или физические травмирующие факторы, клетки Лангерганса дают базальным клеткам эпидермиса сигнал к усиленному делению.

Кератиноциты

Основными клетками эпидермиса являются кератиноциты, которые повторяют в миниатюре путь каждого живущего на земле организма. Они рождаются, проходят определенный путь развития и в конце концов умирают. Смерть кератиноцитов - запрограммированный процесс, который является логическим завершением их жизненного пути. Оторвавшись от базальной мембраны, они вступают на путь неизбежной гибели и, постепенно продвигаясь к поверхности кожи, превращаются в мертвую клетку - корнеоцит (роговая клетка). Этот процесс так хорошо организован, что мы можем разделить эпидермис на слои - в каждом слое находятся клетки на определенной стадии развития (или, как говорят ученые, дифференцировки). На базальной мембране сидят зародышевые клетки. Их отличительной особенностью является способность к бесконечному (или почти бесконечному) делению. Считается, что популяция активно делящихся клеток расположена в тех участках базальной мембраны, где эпидермис углублен в дерму. К старости эти углубления сглаживаются, что считается признаком истощения зародышевой популяции клеток кожи. Клетки базального слоя кожи делятся, порождая потомков, похожих на материнские клетки как две капли воды. Но рано или поздно некоторые из дочерних клеток отрываются от базальной мембраны и вступают на путь взросления, ведущий к гибели. Отрыв от базальной мембраны служит пусковым сигналом для синтеза белка кератина, который по мере продвижения клетки вверх заполняет всю цитоплазму и постепенно вытесняет клеточные органеллы. В конце концов кератиноцит теряет ядро и превращается в корнеоцит - плоскую чешуйку, набитую кератиновыми гранулами, придающими ей жесткость и прочность. Это происходит в самом верхнем слое кожи, который называют роговым. Роговой слой, состоящий из мертвых клеток, является основой эпидермального барьера нашей кожи.

Согласно современным взглядам, роговой слой состоит из плоских кератиновых чешуек, которые как кирпичи зацементированы липидной (жировой) прослойкой. Липидная прослойка образована особыми молекулами - так называемыми полярными липидами. Эти липиды отличаются от неполярных липидов тем, что они состоят из гидрофильной головы и гидрофобного хвоста. В воде молекулы полярных липидов самостоятельно группируются таким образом, чтобы гидрофобные хвосты были спрятаны от воды, а гидрофильные головы, напротив, были обращены в водную среду. Если таких липидов мало (или если смесь липидов и воды хорошо встряхнуть), то образуются шарики. Если молекул много, то они образуют протяженные двухслойные пласты.

Эпидермальный барьер

Липидные пласты рогового слоя построены из липидов, которые относятся к классу сфинголипидов, или церамидов. Впервые сфинголипиды были выделены из мозговой ткани. Свое второе название - церамиды - они получили от латинского слова cerebrum (мозг). Позже было найдено, что церамиды участвуют в построении эпидермального барьера, формируя липидную прослойку между роговыми чешуйками. Церамиды состоят из жирного спирта сфингозина (образует голову) и одной жирной кислоты (хвост). Если в жирной кислоте имеются двойные связи, то она называется ненасыщенной, если двойных связей нет, то говорят, что кислота насыщенная. В зависимости от того, какая жирная кислота прикреплена к голове церамида, липидные пласты, построенные из них, получаются более или менее жидкими. Самые твердые (кристаллические) липидные пласты образованы церамидами с насыщенными хвостами. Чем длиннее хвост церамида и чем больше в нем двойных связей, тем более жидкими получаются липидные структуры.

Среди церамидов особо выделяются длинноцепочечные церамиды. Их хвосты представлены жирными кислотами, имеющими в своей цепочке более 20 атомов углерода. Длинноцепочечные церамиды выполняют роль заклепок, скрепляя соседние липидные пласты. Благодаря им многослойная липидная прослойка не расслаивается и представляет собой целостную структуру. Церамиды в последнее время стали очень популярными ингредиентами в косметике. Популярность церамидов объясняется той ролью, которую они играют в поддержании целостности эпидермального барьера. Благодаря наличию многослойной липидной прослойки между роговыми чешуйками, роговой слой способен эффективно защищать кожу не только от проникновения посторонних веществ извне, но и от обезвоживания. Как мы увидим, действие всех косметических средств надо оценивать прежде всего с точки зрения их воздействия на эпидермальный барьер, так как он довольно уязвим и легко разрушается. Нарушение целостности эпидермального барьера приводит к серьезным последствиям для кожи прежде всего вследствие нарушения водного баланса эпидермиса.

Кислотная мантия кожи

Поверхность нормальной кожи имеет кислую реакцию, и ее рН (мера кислотности) составляет 5,5 (нейтральный рН равен 7,0, а рН крови - 7,4). Практически все живые клетки (в том числе большая часть бактериальных) очень чувствительны к изменениям рН, и даже небольшое закисление для них губительно. Только кожа, покрытая слоем погибших ороговевших клеток, может себе позволить облечься в кислотную мантию (ее называют еще мантией Маркионини). Кислотная мантия кожи образована смесью кожного сала и пота, в которую добавлены органические кислоты - молочная, лимонная и другие. Эти кислоты образуются в результате биохимических процессов, протекающих в эпидермисе. Кислотная мантия кожи является первым звеном защиты от микроорганизмов, так как большинство микроорганизмов не любят кислую среду. И все-таки есть бактерии, которые постоянно живут на коже, например Staphylococcus epidermidis, лактобактерии. Они предпочитают жить именно в кислой среде и даже сами вырабатывают кислоты, внося свой вклад в формирование кислотной мантии кожи. Бактерии Staphylococcus epidermidis не только не приносят вреда коже, но даже выделяют токсины, которые обладают антибиотикоподобным действием и угнетают жизнедеятельность патогенной микрофлоры. Частое умывание с щелочным мылом может разрушить кислотную мантию. Тогда "хорошие" кислотолюбивые бактерии окажутся в непривычных условиях, а "плохие", кислоточувствительные бактерии получат преимущество. К счастью, кислотная мантия здоровой кожи достаточно быстро восстанавливается.

Кислотность кожи нарушается при некоторых кожных заболеваниях. Например, при грибковых заболеваниях рН возрастает до 6 (слабо кислая реакция), при экземе до 6,5 (почти нейтральная реакция), при угревой болезни до 7 (нейтральная). Надо отметить, что на уровне базального слоя эпидермиса, где располагаются зародышевые клетки, рН кожи становится равным рН крови - 7,4.

Дерма

Дерма играет роль каркаса, который обеспечивает механические свойства кожи - ее упругость, прочность и растяжимость. Она напоминает комбинацию водного и пружинного матраца, где роль пружин играют волокна коллагена и эластина, все пространство между которыми заполнено водным гелем, состоящим из мукополисахаридов (гликозаминогликанов). Молекулы коллагена на самом деле напоминают пружины, т. к. в них белковые нити скручены наподобие спиралей. Гликозаминогликаны - это большие полисахаридные молекулы, которые в воде не растворяются, а превращаются в сеточку, ячейки которой захватывают большое количество воды - образуется вязкий гель. Вблизи базальной мембраны дерма содержит больше гликозаминогликанов, а ее "пружины" более мягкие. Это так называемый сосочковый слой дермы. Он образует мягкую подушку непосредственно под эпидермисом. Под сосочковым слоем располагается сетчатый слой, в котором коллагеновые и эластиновые волокна формируют жесткую опорную сетку. Эта сетка также пропитана гликозаминогликанами. Главным гликозаминогликаном дермы является гиалуроновая кислота, которая имеет самую большую молекулярную массу и связывает больше всего воды.

Состояние дермы, этого матраца, на котором покоится эпидермис, его упругость и устойчивость к механическим нагрузкам определяются как состоянием "пружин" - волокон коллагена и эластина, так и качеством водного геля, образованного гликозаминогликанами. Если матрац не в порядке - ослабли пружины, или гель не держит влагу - кожа начинает обвисать под действием силы тяжести, смещаться и растягиваться во время сна, смеха и плача, сморщиваться и терять упругость. В молодой коже и коллагеновые волокна, и гликозаминогликановый гель постоянно обновляется. С возрастом обновление межклеточного вещества дермы идет все медленнее, накапливаются поврежденные волокна, а количество гликозаминогликанов неуклонно уменьшается. Найти способы воздействия на дерму - заветная мечта косметологов, т. к. это позволило бы реально устранять морщины. К сожалению, на деле добиться достоверного эффекта пока удается лишь пластическим хирургам.

Кроме коллагена, эластина и гликозаминогликанов (межклеточного вещества) дерма содержит клеточные элементы, кровеносные сосуды и железы (потовые и сальные) Основная задача клеток дермы - синтезировать и разрушать межклеточное вещество. В основном, этим занимаются фибробласты. Фибробласты производят многочисленные ферменты, с помощью которых они разрушают коллаген и гиалуроновую кислоту, а также синтезируют эти молекулы заново. Этот процесс происходит непрерывно, и благодаря ему межклеточное вещество постоянно обновляется. Особенно быстро протекает метаболизм гиалуроновой кислоты. В стареющей коже активность фибробластов снижается, и они все хуже справляются со своими обязанностями. Особенно быстро утрачивается способность к синтезу межклеточного вещества. А вот разрушительные способности долгое время остаются на прежнем уровне (ломать - не строить!). Поэтому в стареющей коже толщина дермы уменьшается, содержание влаги в ней падает, в результате кожа теряет ее упругость и эластичность.

Кроме фибробластов важными клетками дермы являются макрофаги. Они играют роль стражей порядка и следят за тем, чтобы чужеродные вещества не попадали в кожу. Макрофаги не обладают специфической памятью, поэтому их борьба с нарушителями порядка не приводит к развитию аллергической реакции. Все макрофаги наделены полномочиями отдавать приказы окружающим клеткам. Для этого они производят большое количество регуляторных молекул - цитокинов. Так же, как и фибробласты, макрофаги становятся менее активны с течением времени. Это приводит к снижению защитных свойств кожи и к неправильному поведению других клеток, которые ждут сигналов от макрофагов. В этом случае кожа напоминает страну при слабом правителе - падает боеготовность армии, ослабевает дисциплина, разрушается экономика. Чтобы как-то компенсировать это, в некоторые косметические средства и пищевые добавки включают вещества, стимулирующие макрофаги и заставляющие их активнее исполнять свои функции.

Водный баланс

Вся дерма пронизана тончайшими кровеносными и лимфатическими сосудами. Кровь, протекающая по сосудам, просвечивает сквозь эпидермис и придает коже розовый оттенок. Из кровеносных сосудов в дерму поступает влага и питательные вещества. Влага захватывается гигроскопичными (связывающими и удерживающими влагу) молекулами - белками и гликозаминогликанами, которые при этом переходят в гелевую форму. Часть влаги поднимается выше, проникает в эпидермис и потом испаряется с поверхности кожи. Кровеносных сосудов в эпидермисе нет, поэтому влага и питательные вещества медленно просачиваются в эпидермис из дермы. При уменьшении интенсивности кровотока в сосудах дермы в первую очередь страдает эпидермис. В этом случае кожа напоминает дерево, которое начинает засыхать с верхушки. Поэтому внешний вид кожи во многом зависит от состояния ее кровеносных сосудов. Сосудистая гимнастика, массаж, микротоковая стимуляция и препараты, укрепляющие стенки сосудов и улучшающие микроциркуляцию, будут благотворно сказываться на внешнем виде кожи. Впрочем, возможен и другой вариант, когда сухость эпидермиса объясняется слишком интенсивным испарением воды через роговой слой. В этом случае поступление воды из дермы может сохраняться на прежнем уровне.

Заключение

Большинство органов нашего тела состоит из живых клеток, поэтому эффект от любого (в том числе и лекарственного) воздействия на эти органы можно представить как сумму реакций отдельных клеток. С кожей ситуация несколько иная. Кожа - это совокупность живых клеток, межклеточного вещества (которое занимает довольно большой объем) и неживых клеток (роговых чешуек). Существенное изменение функционирования кожи может быть достигнуто только через изменения в живых клетках, причем процесс этот довольно длительный. Воздействуя на неживые клетки и на внеклеточное вещество можно добиться временного изменения внешнего вида кожи (например, насыщение внеклеточного вещества дермы влагой приведет к разглаживанию кожи и повышению ее упругости, а отшелушивание мертвых чешуек с поверхности кожи осветлит ее). Изменения состояния внеклеточного вещества и слоя неживых клеток могут в свою очередь сказаться на деятельности живых клеток. Тогда кроме временного эффекта, который можно наблюдать сразу после воздействия, в коже будут происходить медленные изменения, результат которых проявится спустя длительное время.

Нанося на кожу косметику, мы часто наблюдаем немедленный эффект. При этом отсроченные эффекты ускользают от нашего внимания. Проследить их самостоятельно практически невозможно. Во-первых, они могут проявляться спустя недели и даже месяцы. Во-вторых, количество веществ, которые мы за это время успеем нанести на кожу, слишком велико, чтобы связать изменения кожи с каким-то конкретным кремом или лосьоном. Поэтому очень важно знать основные объекты воздействия для косметических средств в коже и хорошо представлять, какие из наблюдаемых эффектов могут быть вызваны воздействием на живые клетки, а какие - на другие структуры кожи. Важно уметь не поддаваться иллюзиям и каждый раз задумываться над тем, что реально может косметика.

Свободные радикалы. Определение, номенклатура, классификация.

Free radicals are molecular species, having unpaired electron on the external orbitals and possessing high chemical reactivity. Their study is performed by using EPR (spin trapping technique), chemiluminescence, and inhibitors of reactions, in which radicals of certain type are involved. Main radicals, produced in our body are oxygen radicals (superoxide and hydroxyl radicals), nitrogen monoxide, radicals of unsaturated fatty acids, semiquinones formed in oxidative-reduction reactions (e. g. ubiquinol). Different radicals are also formed under action of ultraviolet rays and in the course of the metabolism of some unnatural compounds (xenobiotics), including some substances, formerly used as medicines.

Что такое свободные радикалы?

Рисунок 1. Электронная структура молекулы метанола

Рисунок 2. Электронная структура радикала метанола

Хорошо известно, что в органических молекулах (включая те, из которых состоит наш организм) электроны на внешней электронной оболочке располагаются парами: одна пара на каждой орбитали (рис. 1)
Свободные радикалы отличаются от обычных молекул тем, что у них на внешней электронной оболочке имеется неспаренный (одиночный) электрон (рис. 2 и 3).
Неспаренный электрон в радикалах принято обозначать точкой. Например, радикал гидроксила обозначают как HO·, радикал перекиси водорода как HOO·, радикал супероксида как ·OO- или O2·-. Ниже даны формулы трех радикалов этилового спирта: CH3CH2O·; CH3·CHOH; CH3CH2O·

Итак:
Свободным радикалом называется частица - атом или молекула, имеющая на внешней оболочке один или несколько неспаренных электронов.

Это делает радикалы химически активными, поскольку радикал стремится либо вернуть себе недостающий электрон, отняв его от окружающих молекул, либо избавиться от "лишнего" электрона, отдавая его другим молекулам.
В особом положении оказалась молекула кислорода (диоксигена), которая содержит на внешней оболочке целых два неспаренных электрона. Таким образом, диоксиген - это бирадикал и, подобно другим радикалам, обладает высокой реакционной способностью.

Рисунок 3. Электронная структура некоторых молекул и радикалов

Важно подчеркнуть, что неспаренные электроны должны находиться на внешней оболочке атома или молекулы. В понятие свободного радикала не включаются ионы металлов переменной валентности, неспаренные электроны в которых находятся на внутренних оболочках. Поскольку и радикалы и ионы таких металлов как железо, медь или марганец (так же как комплексы этих металлов) дают сигналы электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), эти частицы в совокаупности часто называют парамагнитными центрами.
Образование радикалов из устойчивых молекул обусловлено, таким образом, появлением на свободной, валентной орбитали нового электрона или наоборот - удалением одного электрона из электронной пары. Эти процессы обычно происходят в результате реакций одноэлектронного окисления или восстановления. В таких реакциях обычно участвует, наряду с молекулой, из которой радиукал образуется, ион металла переменной валентности, который ка раз и служит донором или акцептором одного электрона (а не двух сразу, как это бывает в реакиях между двумя органическими молекулами или между органической молекулой и кислородом). Типичный пример реакции, в которой образуется радикал - это реакция Фентон: взаимодействие пероксида водорода с ионом двухвалентного железа:
Fe2+ + H2O2 => Fe3+ + OH- + ·OH (радикал гидроксила)
При высоких температурах или под действием ультрафиолетового излучения радикалы могут образовываться также в результате разрыва химической связи (гомолитическое расщепление). В обычных условиях такие реакции в нормальных живых клетках практически не имеют места.

Номенклатура радикалов

Относительно недавно Комиссия по Номенклатуре Неорганической химии сформулировала основные правила номенклатуры радикалов (см. {Koppenol, 1990 #7})[382] (табл. 1).

Таблица 1. Названия некоторых радикалов и молекул согласно рекомендациям Комиссии по Номенклатуре Неорганической Химии (1990).
Формула	Структурная формула	Название радикала
O·-	·O-	Оксид (1-), [оксид]
О2	·ОО·	[Диоксиген]
О2·-	·ОО-	Диоксид (1-), супероксид, [диоксид]
O3	O   / \ O--O	Триоксиген, [озон]
°O3·-	·OOO-	Триоксид (1-), озонид
HO·	HO· или ·OH	[Гидроксил]
HO2·	HOO·	Гидродиоксид, [гидродиоксил]
Н202	HOOH	[Перекись водорода]
RO·	RO·	[Алкоксил]
C2H5O·	CH3CH2O·	[Этоксил]
R02·	ROO·	[Алкилдиоксил]
RO2H	ROOH	[Апкилгидропероксид]

Остановимся на некоторых из этих рекомендаций. Прежде всего нет необходимости писать "свободный" перед словом радикал [533]. О радикальной природе рассматриваемой частицы говорит окончание "ил". Так радикалы RO· и НО· имеют наименование, соответственно "алкоксил" и "гидроксил".
Существенно новым можно считать рекомендацию не злоупотреблять производными от "пероксид" и "гидропероксид". Группа из двух связанных между собой атомов кислорода называется "диоксид". В соответствии с этим радикал ROO· рекомендуется называть "алкилдиоксилом" {Koppenol, 1990 #7}. Допускается сохранение и альтернативного названия "алкилпероксил", но это хуже {Koppenol, 1990 #7}. Молекулярный кислород называется "диоксигеном", а озон - "триоксигеном".
Наименование с окончанием "ил" весьма удобно, но ничего не горит о том, каков заряд частицы. Поэтому в необходимых случаях рекомендуется использовать систематическое название радикала, где после названия группы дается в скобках заряд. Например радикал O₂^·- имеет наименование "диоксид (1-)". В этой работе мы будем использовать более краткое название "диоксид".При написании формул радикалов в суперскрипте сначала ставится точка, указывающая на наличие неспаренного электрона у данного атома, а затем знак заряда иона. Например "O₂^·-". В структурных формулах точка должна стоять именно у того атома, где локализован неспаренный электрон. Например, чтобы подчеркнуть, что диоксиген имеет два неспаренных электрона, можно написать его формулу таким образом "О₂". В таблице 1 приведен список рекомендуемых названий радикалов; в квадратных скобках даны названия, которые будут преимущественно использованы в данной книге.

Радикалы, встречающиеся в нашем организме

Первичные радикалы и реактивные молекулыВсе радикалы, образующиеся в нашем организме, можно разделить на природные и чужеродные. В свою очередь природные радикалы можно разделить на первичные, вторичные и третичные {Владимиров, 1998 #8}. (См. схему на рис. 4).

Рисунок 4. Классификация свободных радикалов, образующихся в нашем организме

Первичными можно назвать радикалы, образование которых осуществляется при участии определенных ферментных систем. Прежде всего к ним относятся радикалы (семихиноны), образующиеся в реакциях таких переносчиков электронов, как коэнзим Q (обозначим радикал как Q·) и флавопротеины. Два других радикала - супероксид (·OO^-) и монооксид азота (·NO) также выполняют полезные для организма функции, которые будут подробнее рассмотрены в соответствующих разделах.
Из первичного радикала - супероксида, а также в результате других реакций, в организме образуются весьма активные молекулярные соединения: перекись водорода, гипохлорит и гидроперекиси липидов (см. рис. 5). Такие молекулы, наряду с радикалами, получили в англоязычной литературе название "reactive species", что в русской литературе чаще всего переводится как "активные формы". Чтобы провести водораздел между радикалами и молекулярными продуктами, мы предлагаем называть последние "реактивными молекулами". Таким образом, предлагается такая терминология:
Активные формы = свободные радикалы + реактивные молекулы
Halliwell предлагает термины активные формы кислорода, азота и хлора {Halliwell, 1998 #9}. Как видно из схемы на рис. 5, к активным формам кислорода относятся супероксид, радикал гидроксила, перекись водорода и синглетный кислород. Окись азота и результат ее взаимодействия с супероксидом - пероксинитрит предлагается называть активными формами азота. Активной формой хлора можно назвать гипохлорит, образуемый в реакции перекиси водорода с ионом хлорида, которую катализирует фермент миелопероксидаза.

Рисунок 5. Активные формы (Reactive species) кислорода, азота и хлора

В складывающейся в настоящее время терминологии нужно найти место радикалам и гидроперекисям полиненасыщенных жирных кислот, которые образуются в очень важной реакции цепного окисления липидов. С химической точки зрения - это неоднородная группа. При отрыве атома водорода от молекулы полиненасыщенной жирной кислоты образуется алкисльный радикал, в котором неспаренный электрон локализован у углеродного атома. Это как бы "активная форма углерода". Но при дальнейшем взаимодействии алкильного радикала с диоксигеном (молекулярным кислородом) образуется диоксид-радикал с локализацией неспаренного электрона на атоме кислорода. По структуре, и отчасти по свойствам, такой радикал напоминает супероксид, и его можно отнести к активным формам кислорода, что и делают некоторые авторы. Образующиеся при перекисном окислении липидов гидроперекиси ненасыщенных жирных кислот также можно отнести к этой категории активных форм, по аналогии с пероксидом водорода. В эту же категорию попадают тогда и алкоксильные радикалы липидов, образующиеся при одноэлектронном восстановлении гидроперекисей, например, ионами Fe²⁺; по сути, это гомологи гидроксильного радикала.
Несмотря на все сказанное, мы предлагаем объединить все перечисленные продукты (и реагенты) цепного окисления липидов одним термином: активные формы липидов. Для биолога и врача все же важнее, не у какого именно атома локализован непарный электрон, а какая молекула при этом становится химически агрессивной, т. е. приобретает черты свободного радикала или его реактивного предшественника. Итак, к активным формам липидов мы отнесем алкильные, алкоксильные и диоксид-радикалы. а также гидроперекиси полиненасыщенных жирных кислот и соответствующих цепей фосфолипидов, триглицеридов или холестерина (см.рис. 5).
Вторичные и третичные радикалы
Реактивные молекулы: перекись водорода, гидроперекиси липидов, пероксинитрит, - образуются в реакциях, одним из участников которых в большинстве случаев является радикал, а иногда - диоксиген, который, впрочем, тоже имеет неспаренные электроны на внешней электронной оболочке. В свою очередь, эти молекулы, а наряду с ними - гипохлорит, охотно образуют радикалы в присутствии ионов металлов переменной валентности, в первую очередь - ионов двухвалентного железа. Такие радикалы мы будем называть вторичными; сюда относятся радикал гидроксила и радикалы липидов. Вторичные радикалы, в отличие от первичных, образуются в неферментативных реакциях и, насколько известно в настоящее время, не выполняют физиологически-полезных функций. Напротив, они обладают разрушительным действием на клеточные структуры и с полным основанием могут быть названы вредными радикалами. Именно образование вторичных радикалов (а не радикалов вообще) приводит к развитию патологических состояний и лежит в основе канцерогенеза, атеросклероза, хронических воспалений и нервных дегенеративных болезней (см. обзоры {Cross, 1987 #4}{Cross, 1994 #5}{Darley-Usmar, 1995 #10}{Darley-Usmar, 1996 #11}). Впрочем, реактивные молекулы также обладают цитотоксическим действием, причем не только благодаря образованию из них свободных радикалов, но и непосредственно, как это доказано для пероксинитрита и гипохлорита, а в некоторых ситуациях - и для перекиси водорода.
Для защиты от повреждающего действия вторичных радикалов в организме используется большая группа веществ, называемых антиоксидантами, к числу которых принадлежат ловушки, или перехватчики свободных радикалов. Примером последних служат альфа-токоферол, тироксин, восстановленный убихинон (QH₂) и женские стероидные гормоны. Реагируя с липидными радикалами, эти вещества сами превращаются в радикалы антиоксидантов, которые можно рассматривать как третичные радикалы (см. рис. 3).
Наряду с этими радикалами, постоянно образующимися в том или ином количестве в клетках и тканях нашего организма, разрушительное действие могут оказывать радикалы, появляющиеся при таких воздействиях, как ионизирующее излучение, ультрафиолетовое облучение или даже освещение интенсивным видимым светом, например, светом лазера. Такие радикалы можно назвать чужеродными. К ним принадлежат также радикалы, образующиеся из попавших в организм посторонних соединений, ксенобиотиков, многие из которых оказывают токсическое действие именно благодаря свободным радикалам, образующимся при метаболизме этих соединений (рис. 3).

Как изучают свободные радикалы и реакции, в которых они участвуют?

Основные методы изучения реакций с участием радикаловОб участии свободных радикалов в том или ином процессе, будь то химическая реакция в пробирке или развитие патологического состояния в организме, можно судить, используя прямые и непрямые методы ([1], стр. 19-32). "Самый прямой" метод изучения свободных радикалов - метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). По наличию, амплитуде и форме сигналов (спектров) ЭПР можно судить о существовании непарных электронов в образце, определять их концентрацию, а иногда и выяснить, какова химическая структура радикалов, которые эти непарные электроны содержат. К прямым методам изучения радикалов можно отнести также метод хемилюминесценции (ХЛ). При взаимодействии радикалов друг с другом выделяется много энергии, которая в некоторых случаях испускается в виде фотонов (квантов света). Интенсивность такого свечения (ХЛ) пропорциональна скорости реакции, в которой участвуют радикалы и, следовательно - их концентрации.
Главными непрямыми методами изучения реакций, в которых участвуют радикалы, служат определение концентрации конечных продуктов реакции, а также применение ингибиторов. Остановимся подробнее на этих методах.
Ингибиторный анализ
Радикалы обладают высокой реакционной способностью и изучать их обычными химическими методами невозможно: стандартные процедуры вроде хроматографии или центрифугирования совершенно бесполезны. Биохимические анализы позволяют, правда, определять конечные продукты реакций, в которых предполагается участие радикалов, но всегда остается вопрос, а действительно ли радикалы участвовали в процессе и какие именно. Важную роль при решении таких вопросов играет так называемый ингибиторный анализ.
Классическим примером может служить применение фермента супероксиддисмутазы (СОД). Этот фермент катализирует реакцию взаимодействия (дисмутации) двух супероксидных радикалов с образованием перекиси водорода и молекулярного кислорода. Если добавление СОД тормозит изучаемый процесс, значит, для его протекания необходим супероксид-радикал и остается выяснить, в какой именно реакции этот радикал участвует.
Можно сказать без приувеличения, что современные успехи в изучении роли свободных радикалов в жизни и смерти наших клеток, органов и тканей во многом обязаны именно открытию фермента супероксиддисмутазы (СОД), которое сделали И. Фридович и Мак-Корд около четверти века тому назад. Этот фермент, как уже говорилось, катализирует реакцию:
^.OО^- + ^.ОО^- + 2Н⁺ => O₂ + H₂O
В присутствии другого фермента, каталазы, перекись водорода разлагается с образованием кислорода и воды:
H₂O₂ => O₂ + H₂O
Открытие СОД совершило переворот в умах биохимиков: раз есть фермент, удаляющий свободные радикалы, специально вырабатываемый живыми клетками (и, как выяснилось, чрезвычайно широко распространенный в живой природе), то ясно, что и сами радикалы существуют в природе и почему-то их надо обязательно удалять. До этого мало кто из биохимиков осознавал, что в метаболизме живых организмов участвуют не только "настоящие" молекулы, но и свободные радикалы. Затем СОД и каталаза стали широко использоваться во всех исследованиях, где изучают роль супероксида и перекиси водорода в том или ином процессе, будь то индивидуальная биохимическая реакция или развитие болезни у лабораторных животных или человека. Если, например, добавление СОД резко тормозит изучаемый процесс, значит, для его протекания необходим супероксид-радикал и теперь предстоит лишь выяснить, в какой именно химической реакции этот радикал участвует. Если же процесс тормозится каталазой, значит, в нем участвует перекись водорода, разлагаемая этим ферментом.
Таков же принцип применения других ингибиторов. Так для выяснения роли липидных радикалов используют жирорастворимые "ловушки" радикалов, к числу которых относятся каротиноиды и токоферолы (витамин Е). Эти вещества, реагируя с радикалами L· или LOO·, обрывают цепи окисления и ингибируют пероксидацию липидов. Таким же свойством обладают стероидные гормоны и тироксин. Антиоксидантное действие этих веществ проявляется и в их влиянии на кинетику хемилюминесценции (см. например, рис. 3, Б). Широко применяется также синтетическая "ловушка" радикалов, ди-трет-бутилгидрокситолуол (ионол).
Другие ловушки радикалов не так специфичны, но тоже иногда используются. Так, водорастворимые радикалы эффективно "перехватываются" аскорбиновой или мочевой кислотой. Для "улавливания" гидроксил-радикалов (HO·) используют маннитол или бензойную кислоту, а иногда - этанол. Для выяснения участия в каком-нибудь процессе реакций цепного окисления липидов (см. ниже) используют жирорастворимые "ловушки" липидных радикалов, которые ведут цепи окисления. К числу таких ловушек относятся токоферол (витамин Е) и некоторые синтетические соединения, например трет-бутилгидрокситолуол (ионол). Водо-растворимые радикалы эффективно "перехватываются" аскорбиновой или мочевой кислотой. Для "улавливания" радикалов гидроксила (HO·) используют маннитол или бензойную кислоту, а иногда - этанол. Надо однако сказать, что далеко не всегда ловушки специфичны: многие из них реагируют не только с радикалами, но и с достаточно активными молекулами.
Метод электронного парамагнитного резонанса
Хотя польза исследований, основанных на изучении молекулярных продуктов свободнорадикальных реакций и ингибиторного анализа, сомнений не вызывает, не следует пренебрегать возможностью прямого обнаружения свободнорадикальных реакций и непосредственного изучения изменения их концентрации в ходе исследуемого процесса.
На сегодняшний день существует два прямых метода обнаружения радикалов: электронный парамагнитный резонанс (ЭПР) и хемилюминесценция (ХЛ).

Рисунок 6. Сигналы ЭПР некоторых радикалов, образующихся в живых клетках.

Рисунок 7. Измерение радикалов в проточной кювете

Методом ЭПР удается довольно уверенно изучать радикалы семихинонов, в частности, радикалы убихинола и токоферола (см. спектры на рис. 6). Радикалы активных форм кислорода и липидов непосредственно наблюдать обычно не удается. Лишь используя метод быстрого смешивания двух растворов при их непрерывном протоке (см. рис. 7), удалось наблюдать сигналы ЭПР липидных радикалов, образующихся при разложении гидроперекисей линолевой кислоты ионами Ce⁴⁺ и Fe²⁺, правда, довольно слабые, несмотря на огромные расходы реактивов {Осипов, 1980 #594}. Попытки непосредственно обнаружить методом ЭПР радикалы кислорода или липидов в биологических системах оказались неудачными, поскольку стационарные концентрации большинства радикалов, таких как радикалы кислорода или липидов, в биологических системах слишком малы. Успех пришел, однако, после разработки метода спиновых ловушек.
Спиновые ловушки
При всех достоинствах метода ЭПР, его чувствительности оказывается зачастую недостаточной для обнаружения свободных радикалов, которые между тем не только образуются в исследуемом образце, но и участвуют в важных процессах, в нем протекающих. Вся беда в высокой химической активности радикалов. В биологических системах скорости образования радикалов кислорода или липидных радикалов в мембранах не так уж велики, зато очень велики скорости исчезновения этих радикалов; поэтому концентрация радикалов в каждый данный момент времени (так называемая стационарная концентрация) зачастую так мала, что их невозможно обнаружить методом ЭПР. Чем активнее радикал, тем ниже его стационарная концентрация и тем меньше шансов "увидеть" его методом ЭПР. Выход из положения заключается в том, что активные радикалы переводятся в неактивные, стабильные, которые регистрируются с помощью ЭПР. С этой целью к изучаемому образцу (например, к суспензии клеток, гомогенату ткани или раствору, где протекают реакции с участием свободных радикалов) добавляют особые вещества, называемые спиновыми ловушками (хотя "ловят" они, конечно не спины, а радикалы). Например, для "улавливания" гидроксил-радикалов HO^. используют фенилбутилнитрон (ФБН).

Рисунок 9. Фенилбутилнитрон (ФБН)

При взаимодействии ловушки с радикалом происходит присоединение радикала к ловушке с образованием нового, стабильного радикала, получившего название "спинового аддукта" (от английского слова add - добавлять, складывать). Сигналы ЭПР спиновых аддуктов разных радикалов слегка различаются по форме. Это позволяет идентифицировать радикалы, образующиеся в изучаемой системе. На рисунке 8, слева, приведен сигнал ЭПР спинового аддукта ФБН с ОН-радикалом, образовавшемся при разложении ионами двухвалентного железа перекиси водорода, а справа - сигнал ЭПР того же аддукта, образующегося в присутствии ФБН при взаимодействии гипохлорита с ионами двухвалентного железа.

Рисунок 8. Сигналы ЭПР спиновых аддуктов, образующихся в результате захвата гидроксильного радикала ловушкой ФБН.

Для улавливания других радикалов (скажем, супероксида) используют другие ловушки. Поскольку спиновая ловушка "перехватывает" свободные радикалы, она тормозит (ингибирует) тот процесс, который этими радикалами вызывается, например, уменьшает повреждение живых клеток радикалами. ОН. Таким образом, спиновые ловушки используются в двух целях: чтобы выяснить, какие радикалы образуются и какие процессы в клетке они вызывают.
Метод хемилюминесценции
К эффективным методам изучения реакций, идущих с участием радикалов, можно отнести метод хемилюминесценции (ХЛ). В основе его лежит то обстоятельство, что при взаимодействии радикалов друг с другом выделяется много энергии, которая может испускаться в виде фотонов (квантов света). Интенсивность такого свечения (ХЛ) пропорциональна скорости реакции, в которой участвуют радикалы и, следовательно, показывает изменение их концентрации в ходе изучаемого процесса. Подробнее об этом будет сказано в лекции "Собственная хемилюминесценция ("сверхслабые свечения") в биологических системах".
Изучение кинетики реакций
Реакции с участием свободных радикалов, в особенности реакции цепного окисления, отличаются большой сложностью и протекают через ряд последовательных стадий. В изучении механизма цепных реакций основную роль сыграло исследование кинетики процессов; при этом измерение кинетики хемилюминесценции позволяет непосредственно видеть изменение во времени концентрации радикалов, например радикалов липидов. Параллельное измерение хемилюминесценции, окисления ионов двухвалентного железа и накопления продуктов реакции в суспензиях митохондрий и фосфолипидных везикул (липосом) позволило экспериментально определить константы скоростей основных реакций свободнорадикального цепного окисления липидов, как это будет рассмотрено несколько позже более подробно.

Антиоксиданты природные и синтезированные

Виктория Чугасова, к.б.н.

В биологических системах антиоксидантами называются вещества, способные ингибировать процессы свободнорадикального окисления. Для живых клеток наибольшую опасность представляет цепное окисление полиненасыщенных жирных кислот, или перекисное окисление липидов (ПОЛ). В реакциях ПОЛ образуется большое количество липидных гидроперекисей, которые обладают высокой реакционной способностью и оказывают мощное повреждающее действие на клетку¹. В последнее время свободные радикалы и реакции с их участием считаются причиной возникновения:

• старения,
• раковых заболеваний,
• артрита,
• эмфиземы,
• атеросклероза,
• астмы,
• диабета,
• болезни Альцгеймера,
• болезни Паркинсона,
• катаракты и мн. др.

Защита организма от этих и многих других заболеваний - основная задача антиоксидантной системы². Антиоксиданты предотвращают перекисное окисление липидов и не дают свободным радикалам накапливаться в организме. Однако, естественная антиоксидантная система организма часто оказывается перегруженной и буквально захлебывается лавиной свободных радикалов. Это состояние называется окислительным стрессом. Чаще всего окислительный стресс вызывается УФ излучением, которое не только индуцирует свободнорадикальное окисление, но и нарушает работу ферментных антиоксидантов кожи³ . По мнению ученых, антиоксидантные пищевые добавки и косметические средства могут предотвращать окислительный стресс и замедлять процессы старения⁴.

Антиоксиданты в косметике

Антиоксидантные добавки вводятся в рецептуру косметических средств не только для защиты кожи, но и для предотвращения перекисного окисления масел, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты. При этом, измеряя скорость разрушения антиоксиданта в косметическом препарате, можно оценить интенсивность протекающих в нем окислительных процессов⁵. Это позволяет при необходимости вносить изменения в рецептуру, увеличивая долю мононенасыщенных (более устойчивых к окислению) масел, подбирая условия хранения или исключая вещества, которые способствуют быстрому окислению (например, фотокатализаторы).

Синергизм антиоксидантов

Антиоксиданты, как правило, оказывают положительный эффект в больших дозах. С другой стороны, известно, что большинство соединений данной группы характеризуется двухфазным действием, т.е. антиоксидантный эффект при превышении некоторой пороговой величины сменяется прооксидантным⁶.
Необходимость использования больших концентраций антиоксидантов объясняется тем, что молекула антиоксиданта разрушается при реакции со свободными радикалами и выбывает из игры. Для того, чтобы антиоксидант эффективно работал, необходимо присутствие восстановителей, которые будут переводить его в активное состояние. Например, витамин С восстанавливает витамин Е, но сам при этом окисляется⁷. Тиоловые соединения (содержащие серу) восстанавливают витамин С⁸, а биофлавоноиды восстанавливают как витамин Е, так и витамин С. Такой же синергизм наблюдается между витамином Е и каротиноидами, а также между витамином Е и селеном. Полагают, что альфа-токоферол предохраняет от окисления селенсодержащие и негемовые железопротеиды и поэтому необходим для поддержания биологической формы селена в активном состоянии. В свою очередь, селен снижает потребность в токофероле и сохраняет его уровень в крови⁹.Таким образом, функциональный синергизм антиоксидантов позволяет добиваться максимального защитного эффекта и высокой стабильности препарата при меньшей концентрации антиоксидантов. В настоящее время ведутся интенсивные исследования по изучению взаимодействия различных антиоксидантов в организме, которые позволят создавать оптимальные антиоксидантные композиции. Можно прогнозировать, что человек, решая проблему антиоксидантов, по-видимому, не сможет изобрести ничего нового и вынужден будет признать, что уникальные композиции, созданные природой, не нуждаются в усовершенствовании. Поэтому мы в первую очередь остановимся на свойствах природных антиоксидантов, а затем скажем несколько слов об их структурных аналогах и о синтетических антиоксидантах.
По механизму действия¹⁰ антиоксиданты можно разделить на:

1. "мусорщиков" (scavenger of free radicals), которые очищают организм от всех свободных радикалов, чаще всего восстанавливая их до стабильных неактивных продуктов;
2. "ловушки" (trap of free radicals) - антиоксиданты, которые имеют сродство к какому-то определенному свободнорадикальному продукту (ловушки синглетного кислорода, гидроксил-радикала и т.д.). Ловушки часто используют для уточнения механизма свободнорадикальной реакции;
3. антиоксиданты, обрывающие цепи (chain breaking antioxidants) - вещества, молекулы которых более реакционноспособны, чем их радикалы. Чаще всего это фенолы, которые легко отдают свои электроны, превращая радикал, с которым они прореагировали, в молекулярный продукт, а сами при этом превращаются в слабый феноксил-радикал, который уже не способен участвовать в продолжении цепной реакции.

Антиокислительная система тканей представлена:

1. ферментными антиоксидантами: супероксиддисмутазой, каталазой, пероксидазами, глутатионредуктазой и восстановленным глутатионом;
2. макромолекулярными неферментативными компонентами: белком-переносчиком железа - трансферрином и другими белками сыворотки, способными связывать ионы железа - церулоплазмином, гаптоглобинами, гемопексином;
3. низкомолекулярными компонентами: женскими половыми гормонами, тироксином, флавоноидами, стероидными гормонами, витаминами А, Е, К, убихиноном, низкомолекулярными SH-соединениями и аскорбиновой кислотой.

Ферментные антиоксиданты

Ферментные антиоксиданты катализируют реакции, в которых активные формы кислорода и некоторые другие окислители восстанавливаются до стабильных и нетоксичных продуктов.Супероксиддисмутаза и каталаза - важнейшие компоненты антиокислительной системы всех клеток организма¹¹. Супероксиддисмутаза (СОД) катализирует реакцию дисмутации супероксидного аниона:
О₂^- + О₂^- + 2Н⁺ --> Н₂О₂ + О₂
Образующиеся в супероксиддисмутазной реакции гидропероксид сам является сильнейшим окислителем. Однако, каталаза клетки, локализованная в пероксисомах, не позволяет накапливаться перекиси водорода:
Н₂О₂ --> 2Н₂О + О₂
Пара "супероксиддисмутаза и каталаза" - это очень мощная антиокислительная система, которая теоретически исключает возможность протекания свободнорадикальных реакций в коже. Однако, ряд факторов внешней среды, среди которых основную роль играет УФ излучение, может существенно снижать активность антиокислительных ферментов.
Глутатионпероксидаза¹² - использует глютатион для восстановления перекиси водорода и липидных гидроперекисей до нейтральных и малотоксичных соединений.
H₂O₂ + 2GSH --> GSSG + 2H₂O
-LOOH + 2GSH --> GSSG + -LOH + H₂O
Окисленный глютатион (GSSG) снова восстанавливается глутатионредуктазой:
GSSG + НАДФН --> 2GSH - НАДФ+
Разрушая гидроперекиси липидов, глютатионпероксидаза регулирует тем самым продукцию арахидоновой кислоты и уменьшает воспаление. Для эффективной работы глютатионпероксидазы необходим селен, который входит в состав активного центра фермента. Дефицит селена нарушает работу глютатионпероксидазы и других селенсодержащих ферментов. Источником селена является злаки, которые накапливают селен, содержащийся в почве. В ряде стран (Китай, Новая Зеландия, Финляндия) почвы бедны селеном, поэтому злаки, выращенные на них, так же содержат мало селена.

Низкомолекулярные вещества

Жирорастворимые антиоксиданты (альфа-токоферол и каротиноиды) играют главную роль в защите основных структурных компонентов биомембран, таких, как фосфолипиды и погруженные в липидный слой белки. Водорастворимые антиоксиданты (тиоловые соединения и аскорбиновая кислота), в свою очередь, проявляют свое защитное действие в водной среде - цитоплазме клетки или плазме крови, инактивируя попадающие туда свободные радикалы.Альфа-токоферол (витамин Е) - жирорастворимый антиоксидант, расположенный в клеточной мембране. Содержится во всех злаках, в пророщенных зернах пшеницы и в растительных маслах, получаемых холодной выжимкой. По подсчетам ученых, только 20-40% алиментарного витамина Е усваивается организмом, поэтому рекомендуется принимать витамин Е дополнительно в качестве пищевой добавки. Альфа-токоферол содержит фенольное кольцо с системой сопряженных двойных связей, поэтому он легко отдает электрон свободным радикалам, восстанавливая их до стабильных продуктов. Феноксил-радикал, который при этом образуется, сам по себе достаточно стабилен и в продолжении цепи не участвует.
Аскорбиновая кислота (витамин С) является мощным восстановителем, который предохраняет от окисления целый ряд биологически активных веществ. Известна роль аскорбиновой кислоты в метаболизме железа в организме. Организм человека усваивает только двухвалентное железо (Fe²⁺), в то время как трехвалентное не только не усваивается, но и приносит много вреда, инициируя реакции перекисного окисления липидов. Восстановление Fe³⁺ в Fe²⁺ осуществляется аскорбиновой кислотой. Следует помнить, что в присутствии окислителей и особенно Fe³⁺ витамин С очень быстро разрушается, поэтому, включая его в рецептуру, необходимо проверить его стабильность в присутствии других ингредиентов. Некоторые производители предпочитают выпускать витамин С в закрытых ампулах, которые смешиваются с косметическим препаратом непосредственно перед употреблением.
Биофлавоноиды - большая группа полифенолов, которые содержатся в водных экстрактах различных растений. Некоторые биофлавоноиды действуют как ловушка гидроксил-радикала (катехин, эпикатехин, рутин). Другие (кверцетин) не снижают содержание гидроксила, зато ингибируют продукцию супероксиданион-радикала (СОД-подобная активность). Третьи (морин) не влияют ни на гидроксил, ни на супероксиданион-радикал, но, тем не менее, проявляют высокую антиоксидантную активность¹³.
Каротиноиды - красные и оранжевые растительные пигменты. Относятся к жирорастворимым антиоксидантам. Наиболее известен бета-каротин, который является предшественником витамина А. Все каротиноиды в той или иной степени являются ловушками синглетного кислорода. Каротиноиды содержатся в красных и оранжевых фруктах и овощах, а так же, соответственно, в их масляных экстрактах и некоторых маслах. Наиболее богато каротиноидами масло облепихи, шиповника, пальмовое масло.
Убихинон (коэнзим Q) - фенол, по химической структуре близок к токоферолам. Он содержится в митохондриях, где участвует в работе дыхательной цепи. Убихинон обладает высокой антиоксидантной активностью, причем его эффективность в пять раз выше, чем у витамина Е. Это весьма существенно для митохондрий, где идут активные окислительные процессы и постоянно образуются свободные формы кислорода¹⁴.
Глютатион содержит SH-группу и относится к тиоловым соединениям. Служит восстановителем в глютатионпероксидазной реакции. Необходим прежде всего для восстановления витамина С в активную форму. В условиях in vitro и в присутствии окислителей витамин С разрушается за считанные минуты. Однако, в клетке, где обязательно есть тиоловые соединения, даже ничтожные количества аскорбата будут эффективной защитой от окисления.

Синтетические антиоксиданты

Ионол (2,6-дитретбутил-4-метилфенол, бутилгидрокситолуол, дибунол) является жирорастворимым фенолом. Его окисленная форма представляет радикал, стабилизированный двумя боковыми третбутильными группировками, а поэтому более стабильный, чем у токоферолов. Ионол успешно применяется для профилактики острых ишемических повреждений органов и постишемических расстройств. Препарат высоко эффективен при лечении лучевых и трофических поражений кожи и слизистых оболочек, успешно используется в терапии больных дерматозами, способствует быстрому заживлению язвенных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки¹⁵.Фенозаны (К⁺- или Li⁺-соли 4-гидрокси-3,5-дитретбутилфенилпропионовой кислоты) синтезированы в ИХФ РАН, являются водорастворимыми производными ионола.
Оксипиридины - группа азотсодержащих гетероциклических фенолов, синтетических аналогов витамина В⁶. Существенным удобством препаратов является их растворимость в воде. К группе синтетических антиоксидантов относятся так же селен-неорганические и селен-органические соединения, механизм антирадикального действия которых связан, в основном, с активацией селен-зависимой глутатионпероксидазы, являющейся первой линией защиты клеток организма от накопления токсических гидропероксидов и свободных радикалов.

Структурные аналоги природных антиоксидантов

В последние годы предпринимаются многочисленные попытки добиться повышения эффективности действия антиоксидантов путем той или иной их структурной модификации. Так, например, имеются сведения о более эффективном действии ферментного препарата СОД в соединении с дериватным носителем, синтезирована большая группа водорастворимых производных витамина Е и бета-каротина.Самое пристальное внимание уделяется соединениями, близким к витамину Е. Так, наряду с самим витамином Е антиоксидантными свойствами обладают его водорастворимые аналоги: тролокс-С и альфа-токоферола полиэтиленгликольсукцинат (ТПГС). Тролокс-С действует как эффективный тушитель свободных радикалов по тому же механизму. что и витамин Е, а ТПГС даже превосходит витамин Е по эффективности.

От теории к практике

С тех пор, как были открыты сложные взаимосвязи антиоксидантов, интерес изготовителей косметики к синтетическим и химически чистым соединениям начал падать. Действительно, выделяя вещество в чистом виде, химики избавлялись от большого количества соединений, которые казались им ненужным балластом. Позднее оказывалось, что без этого балласта выделенное вещество становилось гораздо менее эффективным. Так произошло с каротиноидами, когда выяснилось, что бета-каротин - вовсе не самый эффективный из них, и что есть ряд свойств, которыми обладают одни каротиноиды, и которые совершенно отсутствуют у других соединений этой группы.Так было и с химически чистым витамином С, выделенным из лимонного сока, который быстро разрушался в любом растворе, где встречались ионы железа. Для стабилизации растворов аскорбиновой кислоты пришлось использовать хелаторы (соединения, способные связывать ионы металлов). В чем же секрет устойчивости витамина С в натуральных соках? Оказывается, в растениях витамин С восстанавливается полифенольными соединениями - биофлавоноидами. Действительно, если взять водный растительный экстракт, в котором содержится миллиграммы витамина С, то мы найдем в нем граммы биофлавоноидов. Для каждого растения характерен свой набор биофлавоноидов и свой уникальный антиоксидантный профиль. Помимо известных соединений, обладающих антиоксидантной активностью, растительные экстракты могут содержать много других веществ, свойства которых до сих пор не изучены. Поэтому в последнее время появилось много работ по определению антиоксидантной активности не только отдельных веществ, но и неочищенных растительных экстрактов.
Noda с соавт. (1997, University of California at Berkeley, USA) сравнили антиоксидантную активность нескольких растительных экстрактов. По способности обезвреживать гидроксил-радикалы растительные экстракты расположились в следующем порядке (по убыванию): экстракт зеленого чая, экстракт коры сосны ("Пикногенол"), экстракт Гингко Билоба, смесь биофлавоноидов из различных фруктов. СОД-активность была сходной для всех образцов. Аскорбат-подобная активность оказалась больше у экстракта Гингко Билоба, за которым следовал "Пикногенол", а затем экстракт зеленого чая¹⁶. Вообще, зеленому чаю посвящено довольно много исследований, так как полифенольные соединения, содержащиеся в нем, обладают противораковым действием¹⁷.
Изучение природных антиоксидантов продолжается. Некоторые результаты таких исследований мы предлагаем вашему вниманию в "Справке", приложенной к статье.

Список литературы

1. Владимиров ЮА, Арчаков АИ. "Перекисное окисление липидов в биологических мембранах". Москва, Наука, 1972.
2. Gutteridge JVC, Westermarck T, Halliwell B. "Oxigen damage in biological systems. Free radical, Aging and Degenerative Disease". Ed. by Yohson YE. New York, 1986.
3. Shindo Y, Hashimoto T. "Antioxidant defence mechanism of the skin against UV irradiation: study of the role of catalase using acatalasemia fibroblasts". Arch Dermatol Res 1995; 287(8):747-753.
4. Harman D. "Free radical theory of aging". Mutat Res 1992;275(3-6): 257-66.
5. Martin MR. "Photostability of cosmetic ingredients on the skin". Cosmetics&Toiletries 1997; 112: 65-72.
6. Владимиров ЮА, Потапенко АЯ ."Физико-химические основы фотобиологических процессов". Москва, Высшая школа, 1989.
7. Yi OS, Han D, Shin HQ. "Synergistic antioxidative effects of tocopherol and ascorbic acid in fish oil (lecitin)/water system" .J Am Oil Chem Soc 1991; 5(8): 881-883.
8. Meister A. "On the antioxidant effect of ascorbic acid and glutatione". Biochem Pharmacol 1992; 44(10): 1095-1915.
9. Сучков ВП, Штутман ЦМ, Халмурадов АГ. "Биохимическая роль селена в организме животных". Укр Биохим Журнал 1978; 50(5): 659-671.
10. Круглякова КЕ, Шишкина ЛН. "Общие представления о механизме действия антиоксидантов". Сб. научн. статей "Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo". Москва, Наука, 1992,с.5-8.
11. Percy ME. "Catalase: an old enzime with a new role?" Can Biochem Cell Biol 1984; 62(10): 1006-1014.
12. Кулинский ВИ, Колесниченко ЛС. "Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глютатион-пероксидазы". Усп. Совр. Биологии 1993; 113:107-122.
13. Hanaski Y, Ogawa S, Fukui S. "The correlation between active oxygen scavenging and antioxidative effects of flavonoids". Free Radic Biol Med 1994; 16(6): 845-850).
14. Nohl H. "Oxigen radical release in mitochondria: influence of age". In: "Free Radical, Aging and Degenerative Disease", Ed. by Johson JE, New York, 1986; 8:77-97.
15. Суйфула РД, Борисова ИВ. "Проблемы фармакологи антиоксидантов". Фармакология и Токсикология 1990; 53(6):3-10.
16. Noda Y, Anzai K, Mori A, Kohno M, Shimnei M, Packer L. "Hydroxyl and superoxide anion radical scavenging activities of natural source antioxidants using the computerized JES-FR30 ESR spectrometer system". Biochem Mol Biol Int 1997; 42(1): 35-44.
17. Dreosty IE, Wargovich MJ, Yang CS. "Ingibition of carcinogenesis by tea: the evidence from experimental studies". Crit Rev Food Sci Nutr 1997; 37(8): 761-770.

Комплексный подход к красоте

Ольга Зайкина, к.б.н.,
Институт иммунологии МЗ РФ, Москва

Часть I. Кожа

Красота спасет мир… Это известное утверждение абсолютно верно. Когда люди стремятся к красоте, они не хотят войн. Красота - это созидание, а войны несут разрушение. В мире будет мир, если всеми умами завладеет стремление к красоте.
Красота человеческого тела определяется исправностью состояния его внешних и внутренних органов. Красота - это производное здоровья. Поэтому современная индустрия красоты ориентируется не столько на декоративный эффект, сколько на улучшение здоровья отдельных участков (кожи, волос, ногтей, фигуры) и организма в целом. Ведущие косметические фирмы в своей продукции дают такие сбалансированные сочетания компонентов, чтобы обеспечить дополнительное питание в точке приложения данного препарата, улучшить кровоток, повысить местный иммунитет - и, в конечном счете, добиться оздоровления и длительного улучшения состояния данного участка.Поддержание здоровья и красоты современного человека - это проблема даже для тех, кого природа не обидела генетическим здоровьем и внешними данными. Ухудшение экологической обстановки, постоянные стрессы, несбалансированность и недостаточность питания, высокие плотность населения и уровень коммуникаций, распространение вирусных, бактериальных, грибковых, паразитарных заболеваний, пониженный иммунитет - все это неуклонно ведет к ухудшению здоровья в целом и отрицательно отражается на красоте всех составляющих человеческого облика: осанки, кожи, лица, рук, ног, волос, зубов, ногтей. Сейчас для поддержания здоровья и красоты уже невозможно обойтись без приема витаминных добавок и без использования косметических средств.
Учитывая проблемы сегодняшнего дня, в индустрии красоты все больше и больше применяется комплексный подход. Многие компании выпускают одновременно косметические средства и биологически активные добавки (БАДы) - космецевтики и нутрицевтики. Применение нутрицевтиков усиливает активность космецевтиков, и часто одни и те же вещества используются в составах и тех, и других. Специалисты составляют комплексные программы для решения конкретной проблемы, включая в нее БАДы для внутреннего приема, косметические средства, адекватную диету, гимнастические комплексы или лечебную физкультуру, массажи и аппаратные методы воздействия.
Все большее распространение получает просветительская работа фармацевтических и косметических компаний, представленных на рынке красоты. Прогрессивные компании выпускают не только красочные рекламные проспекты, но и грамотно составленные методические пособия, публикуют разъяснительные статьи в прессе, привлекают к сотрудничеству врачей и ученых. Так как современные препараты и методы многокомпонентны и сложны, такое методическое пособие по косметическим средствам иногда выглядит как небольшой учебник со справочным разделом, где приведен перечень активных ингредиентов, механизм их действия, латинские названия лекарственных растений, рекомендуемые дневные дозировки витаминов, минералов и БАДов. Рассмотрим современные средства по усовершенствованию человеческого тела поэтапно, частями.

Уход за кожей снаружи и изнутри

Кожа - самая многострадальная часть тела человеческого. Она первой принимает на себя все удары - пагубное действие окружающей среды, загазованность, курение, погодные условия, воздействие стрессов. На ней незамедлительно отражаются внутренние неприятности, происходящие в организме: сбои в работе желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой, эндокринной, мочевыводящей и репродуктивной систем - ухудшается цвет кожи, появляются пятна, сыпь, "мешки", морщины, отечность, сыпь, растрескивания, прыщи, сосудистые звездочки, целлюлит. Кожа требует не только повседневного ухода, но и грамотного подбора внешних и внутренних средств ухода с учетом типа кожи, ее особенностей, возраста, заболеваний, аллергии к отдельным активным компонентам, физиологического состояния, климата, условий проживания и многих других факторов. Большое значение имеет режим ухода за кожей, регулярность и последовательность применения космецевтиков и нутрицевтиков.Передовые технологии косметических средств базируются на комплексном подходе, на синергизме компонентов, на одновременном и последовательном использовании средств очищения, питания и стимуляции различных процессов в коже и на составлении линий косметических средств самого разнообразного действия. Рассмотрим, что входит в современные средства для кожи и как эти компоненты сочетаются друг с другом.

Очищение, отбеливание, смягчение, гидратация

Препараты для очищения кожи представлены в различных формах - мыла, гели, молочко, лосьоны, кремы-эксфолианты, пилинги и маски. Для каждого типа кожи должна быть своя очищающая программа. В состав очищающих средств часто входят a-гидроксикислоты (гликолевая, лимонная, яблочная, винная, молочная), их добавляют в чистом виде или в растительных экстрактах. Так как они присутствуют во многих фруктах (цитрусовые, смородина, виноград, яблоки), их называют "фруктовые кислоты". В результате их воздействия сшелушиваются ороговевшие кератиновые чешуйки, кожа разглаживается и усиливается синтез коллагена. Для очищения используют ферменты - протеазы папаин (из папайи) и бромелайн (из ананаса), которые ускоряют слущивание старых отживших клеток. Для отбеливания кожи используют экстракты лимона, огурца, чабреца, розмарина.Современные очищающие средства делают одновременно смягчающими, заживляющими, влагоудерживающими, питательными и активизирующими некоторые процессы.
Влагоудерживающую функцию выполняют высокомолекулярные соединения: гиалуроновая кислота, модифицированный хитин ракообразных, ДНК. В новых технологиях используется NMF (natural moistening factor), натуральный увлажняющий фактор. NMF - это комплекс гигроскопических молекул, которые притягивают к роговому слою кожи влагу, содержащуюся в воздухе. В NMF содержатся гиалуроновая кислота, аминокислоты (серин, глицин, аланин, пролин), мочевина. NMF расположен на поверхности кератиноцитов и наиболее выражен в молодых клетках, а в старых роговых чешуйках он деградирует. Если кожа испытывает недостаток в NMF, поверхность кожи становится более сухой.

Защита

Заживляющие и успокаивающие ингредиенты - это растительные экстракты (календула, алоэ вера, зверобой, горечавка, липа, василек, ромашка, алтей) и эфирные масла (герань, мята, лаванда, хвойные деревья, шалфей). Стягивающим действием обладают экстракты кресс-салата, репейника, шалфея, лимона, сапонарии. Иногда непосредственно в очищающее средство добавляют питательные компоненты: витамины, минералы, аминокислоты, белковые гидролизаты, растительные и животные масла.
Для тела используют очистители со смягчающим экстрактом мускатной розы и комбинациями экстрактов бурых водорослей (для активизации липолиза и оттока тканевой жидкости в клетках подкожной жировой клетчатки) и венотонизирующих компонентов гинкго билоба, сосны приморской и виноградных косточек (для стимуляции периферического кровообращения).
Для кожи с красными пятнами, вызванными пигментным эритрозом или куперозом, рекомендуется совсем другая очищающая программа: метод шелушения не годится, а вместо этого используют мягкие очищающие средства с добавлением венотонизирующих компонентов. При такой коже рекомендуют избегать потребления алкоголя, сигарет, кофе, возбуждающих БАДов, ограничивать пребывание на солнце и регулярно принимать БАДы с теми же венотонизирующими комнонентами.
Ежедневное наружное очищение кожи периодически надо сопровождать курсами внутреннего очищения. Такие внутренние препараты для очищения кожи создают на основе клетчаток и пектинов различного происхождения и экстрактов из бурых и сине-зеленых водорослей, тысячелистника, лопуха, фиалки трехцветной и других лекарственных растений. При плохом состоянии кожи и обильных высыпаниях рекомендуют пройти курс полного очищения организма с помощью многокомпонентных растительных комплексов со слабительным, мочегонным, желчегонным эффектами. К созданию таких препаратов относятся очень серьезно, учитывают синергизм компонентов и все аспекты действия (например, в дополнение к мочегонным в очищающую формулу всегда вводят калий и магний в хорошо усваиваемой форме).Иногда для решения кожных проблем рекомендуют травные очищающие курсы предметного воздействия на отдельные органы (например, почек при наличии отудловатости или "мешков" под глазами или печени при "печеночных" пятнах). Прохождение таких курсов улучшает самочувствие, потенциирует действие наружных очищающих средств и дает заметный омолаживающий эффект.

Питание

Для нормального состояния кожи нужно ежедневное снабжение организма полным набором необходимых витаминов и минералов. Такой набор содержится в сбалансированном дневном рационе с общей калорийностью 5000-6000 ккал. Но столь высококалорийный рацион показан только лицам, занятым тяжелым физическим трудом. При малоподвижном образе жизни энергозатраты организма вполне покрываются рационом с калорийностью 2500-3000 ккал. Женщины часто из боязни поправиться сокращают рацион до 1500 ккал и тем самым создают дефицит микронутрицевтиков (витаминов и минералов), а похудательными диет-программами менее 1000 ккал - еще и дефицит макронутрицевтиков (белков, жиров и углеводов). Такие диеты трагичны для кожи, особенно если они еще и обезжиренные.Разработчики современных нутрицевтиков и космецевтиков учитывают эти негативные тенденции в питании и их тяжелые последствия для кожи: разработаны такие питательные препараты наружного и внутреннего использования, чтобы кожа не страдала от недостаточности питания, и чтобы можно было восстановить кожу, уже поврежденную низкокалорийными диетами. При низкой калорийности питания рекомендуется одновременно использовать и внутренние и наружные добавки, содержащие витамины, минералы, аминокислоты, гидролизаты животных и растительных белков (особенно гидролизаты коллагена) и нуклеиновых кислот. В то время как препараты наружного применения восполняют недостаток питательных веществ в поверхностных клетках кожи, сбалансированные комплексы внутреннего применения доставляют жизненно важные вещества в кровяное русло. Такая биосистема двойного действия оказывается наиболее эффективной для кожи. Положительно влияют на кожу комплексы витаминов, минералов и лекарственных трав, предназначенных для женщин после 30 лет и направленных на стимуляцию выработки женских гомонов и нормализацию овариально-менструального цикла. В таких "женских" композициях часто используются стимуляторы выработки гормонов: например, донг квай, дикий ямс и соя. Опосредованное действие этих препаратов на кожу выражается в замедлении развития морщин и целлюлита.
Не стоит приписывать волшебные свойства какому-либо одному витамину или минералу - для кожи необходим полный витамин-минеральный набор, при дефиците одного из витаминов или минералов "пробуксовывают" все остальные. Особенно важны для кожи витамины антиоксиданты А, С, Е, В1, В2, В5 (пантенол), биотин и F, а из минералов магний, кальций, калий, кремний, марганец, цинк, йод, кобальт, литий. Но хорошей кожи не бывает без нормального кровоснабжения кожи дермы, так что к этому списку следует добавить В3, В6, В12, фолиевую кислоту, а также железо и медь.
Витамин-минеральные добавки в средствах для ухода за кожей представлены комплексами растительного или животного происхождения, дрожжевым экстрактом или добавлены в виде отдельных легко проникающих вглубь кожи биодоступных соединений. В качестве источника микро- и макроэлементов используются термальные воды, вода Мертвого моря, различные глины, морской ил, экстракты водорослей, а качестве источника кремния - экстракт хвоща.
Витамин F - это полиненасыщенные жирные кислоты (линолевая, линоленовая и g-линоленовая). Они нужны для укрепления липидного барьера рогового слоя, который сдерживает чрезмерное испарение влаги, и надо подпитывать ими кожу снаружи. В качестве их источников в кремах используют масла авокадо, огуречника, мускатной розы, проростков пшеницы и кукурузы, ослинника, жожобы, сладкого миндаля, чертополоха, сафлора, макадамии и других растений. Обрабатывать кожу этими маслами лучше вечером, причем применять для этого специальные косметические составы, так как полиненасыщенные жирные кислоты легко окисляются под действием света с образованием агрессивных свободных радикалов. В кремах особенно часто используется масло авокадо, богатое витамином Е и неомыляемыми жирами, которые защищают полиненасыщенные жирные кислоты от окисления.
В состав современных кремов входят церамиды (сфинголипиды) и фосфолипиды. Церамиды состоят из жирного спирта сфингозина и одной жирной кислоты. Фосфолипиды состоят из глицерофосфата и двух жирных кислот. Фосфолипиды и церамиды играют большую роль в поддержании целостности эпидермального барьера.
Для нормальной жизнедеятельности клеток кожи, формирования местного иммунитета и синтеза коллагена и эластина необходимо достаточное поступление аминокислот, особенно лизина, пролина, оксипролина, поэтому в питательные кремы часто включают либо эти аминокислоты, либо их предшественники. В качестве источников аминокислот используют сине-зеленые водоросли, фруктовые и овощные экстракты, молочную сыворотку, гидролизаты моллюсков, гидролизат белков шелковичного червя, гидролизаты животного коллагена и продукт пчеловодства маточное молочко, именуемое иногда "королевское желе" (по прямому переводу с английского royal jelly).
В большинство современных косметических средств (как внутреннего, так и наружного применения) введены антиоксиданты. Согласно свободно-радикальной теории старения, основной причиной старческих изменений в клетках и тканях являются повреждения, вызванные свободными радикалами. Свободные радикалы образуются в результате неферментативного перекисного окисления биологических молекул, особенно липидов и особенно в клеточных мембранах. Образовавшиеся свободные радикалы повреждают белки, липидные структуры и нуклеиновые кислоты, что ускоряет процесс разрушения и старения. Для того чтобы замедлить этот процесс, в нутрицевтики и косметики вводят антиоксиданты: ретинол, каротиноиды, биофлавоноиды, a-токоферол, аскорбиновая кислота, минералы селен, цинк, медь, марганец, аминокислоты глютатион и ацетилцистеин, коэнзим Q10. Антиоксиданты не работают "в одиночку". Они связаны в общую цепочку, в которой взаимно поддерживают друг друга и где основным звеном является глютатион. Природными источниками антиоксидантов, используемых в космецевтиках и нутрицевтиках, служат различные растительные и животные экстракты.
В качестве дополнительного барьера преждевременному старению в состав кремов вводятся солнцезащитные фильтры, которые противостоят разрушительному действию УФ-излучения.
Стимуляция пролиферации клеток, обмена веществ, локального иммунитета и кровообращения.
Эффекты лифтинга и омоложения складываются из очищения, гидратации и питания кожи и стимуляции ряда процессов в коже: пролиферации клеток, обмена веществ, локального иммунитета и кровообращения.
Поведение клеток кожи определяется сигналами, которые они получают из внеклеточного пространства. Сигнальные молекулы - факторы роста и цитокины - контролируют скорость деления и направление дифференцировки клеток эпидермиса. Факторы роста и цитокины - низкомолекулярные белки или гликопротеины - содержатся в тканевых экстрактах (в том числе экстрактах эмбриональных тканей), сперме животных, маточном молочке пчел, молочной сыворотке.
Наиболее часто используемым стимулятором регенерации кожи является комплекс пептидов и низкомолекулярных белков из молочной сыворотки - MPC (milk peptide complex). МРС стимулирует деление клеток базального слоя эпидермиса, повышает местный иммунитет и укрепляет собственную антиоксидантную систему кожи, обеспечиваемую ферментами глутатионпероксидазой и супероксиддисмутазой.
Вторая группа стимуляторов деления клеток базального слоя - ретиноиды. Ретиноиды проникают в кожу напрямую через роговой слой. В эпидермисе ретиноиды контролируют процессы ороговения и пигментации, а в дермальном слое способствуют восстановлению межклеточного матрикса. Ретиноиды способны напрямую стимулировать клетки эпидермиса и задавать им программу деления и дифференцировки.
Коэнзим Q10 ускоряет метаболизм клеток кожи и тоже активизирует пролиферацию клеток. Его относят к anti-aging агентам (замедляющим процесс старения) и добавляют в наружные и внутренние средства для кожи.
Стимуляторами пролиферации клеток кожи и регенерации кожного покрова являются экстракты из проростков злаков (пшеницы, овса, ячменя), некоторых растений (алоэ вера, зверобой, солодка, родиола розовая) и дриелин (очищенный экстракт клеточной стенки дрожжей). Отмечена также стимулирующая активность некоторых масел (чайное дерево, лимон, майоран, базилик).
Экстракт женьшеня - это стимулятор общего действия: он усиливает кровообращение, повышает иммунитет и ускоряет регенерацию. Для стимуляции местного иммунитета используют экстракты эхинацеи, солодки и маточное молочко плюс витамин-минеральные комплексы.
В средства для стареющей кожи обязательно вводят активные начала, укрепляющие стенки сосудов и стимулирующие микроциркуляцию: выделенные биофлавоноиды или их источники и экстракты ряда растений (арника, гамамелис, рускус, конский каштан). Они же входят в антиварикозные средства.
В антицеллюлитные наружные и внутренние средства, помимо венотонизирующих компонентов, входят еще и стимуляторы лимфодренажа, водно-солевого обмена и метаболизма в клетках кожи и жировых клетках (включая липолиз): экстракты бурых и сине-зеленых водорослей, плюща, а также кофеин.
Для переноса гидрофильных активных веществ в эпидермис часто используются трансдермальные переносчики - комплексы гидрофобных молекул, окружающих активные компоненты. Связав с собой активное вещество, переносчик протаскивает его через эпидермальный барьер, через который самостоятельно это активное вещество проникнуть не может. Наиболее популярными трансдермальными носителями являются липосомы - капсулы, построенные из церамидов или фосфолипидов. Стенка липосомы состоит из липидного бислоя, а внутреннее гидрофобное пространство содержит биологически активные вещества.
Но все стимуляторы "работают" только на фоне правильного очищения кожи и адекватного питания кожи: присутствие омертвевших клеток кожи тормозит пролиферацию клеток, а в отсутствие достаточного количества необходимых аминокислот, нуклеотидов, жирных кислот, витаминов и минералов строительство новых клеток невозможно даже при усиленной стимуляции всех процессов.

Вывод

Не надо продавать душу дьяволу за молодость и красоту, как это сделал Фауст, - достаточно правильно подобрать программу ухода за кожей.

Список литературы:

1. Winter R. A consumer's dictionary of cosmetic ingredients. 4th Edition. 1994. NY. Three Rivers Press.
2. Mindell E. Earl Mindell's Supplement Bible. 1998. NY. A Fareside Book.
3. Гриффит В. Витамины, травы, минералы и пищевые добавки. Справочник. 2000. Москва, Издательско-торговый дом "ГРАНД"
4. Аткинс Р. Биодобавки доктора Аткинса. 1999. Москва.Издательство "Рипол Классик".
5. Марголина А., Эрнандес Е., Сеньоре Ж.-М. Клеточная терапия в косметологии
6. Ланкин В.З., Тихадзе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при заболеваниях сердечно-сосудистой системы. 2000. Москва. Издание НИИ кардиологии МЗ РФ.
7. Эрнандес Е. Витамин А и кожа. Часть 1. Тайна ретинола. Косметика и медицина, 2000 (4), стр. 21-33.

источник:

http://www.cmjournal.com/rp103.htm